近日市場(chǎng)監(jiān)管總局批準(zhǔn)發(fā)布了《保健食品中巴比妥類(lèi)化學(xué)成分的快速檢測(cè)-膠體金免疫層析法》（KJ201903），本方法規(guī)定了保健食品中巴比妥類(lèi)化學(xué)成分的膠體金免疫層析快速檢測(cè)方法。

1 范圍

本方法適用于硬膠囊、軟膠囊、丸劑、片劑、散劑及口服液等保健食品中巴比妥類(lèi)化學(xué)成分的快速測(cè)定。

2 原理

本方法采用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析原理。樣品中的巴比妥類(lèi)化學(xué)成分經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）上抗原的結(jié)合，從而致使檢測(cè)線(xiàn)不顯色。通過(guò)檢測(cè)線(xiàn)的顯色與否判讀，定性判定樣品中是否含有巴比妥類(lèi)化學(xué)成分。

3 試劑和材料

除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的二級(jí)水。

3.1 試劑：

3.1.1 無(wú)水乙醇。

3.1.2 提取液：將無(wú)水乙醇（3.1.1）與水按照體積比10:90混勻。

3.1.3 甲醇。

3.2 參考物質(zhì)

3.2.1本方法所用巴比妥、苯巴比妥、異戊巴比妥、司可巴比妥鈉等參考物質(zhì)的中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量見(jiàn)表1，純度≥95%。

注：或等同可溯源物質(zhì)。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

3.3.1 巴比妥類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（0.5 mg/mL）：精密稱(chēng)取巴比妥（或苯巴比妥，異戊巴比妥，司可巴比妥鈉）標(biāo)準(zhǔn)品（3.2.1）適量，置于10mL容量瓶中，加入適量甲醇（3.1.3）超聲溶解后，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0.5 mg/mL的巴比妥類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。﹣20 ℃避光保存，有效期6個(gè)月。

3.3.2 巴比妥類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)中間液（50 μg/mL）：精密量取巴比妥類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（0.5 mg/mL）（3.3.1）1mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇（3.1.3）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為50 μg/mL的巴比妥類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)中間液。

3.4材料

3.4.1免疫膠體金免疫層析試劑盒，適用于保健食品硬膠囊、軟膠囊、丸劑、片劑、散劑及口服液。

3.4.1.1檢測(cè)卡。

4 儀器和設(shè)備

4.1 離心管：15mL。

4.2 渦旋混合器。

4.3 剪刀。

4.4 塑料吸管。

4.5 電子天平：感量為0.01 g。

4.6 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min，轉(zhuǎn)子配套15mL離心管。

4.7移液器：200μL

4.8環(huán)境條件：溫度15℃～35℃，濕度≤80%。

5.分析步驟

5.1試樣制備

取適量樣品，硬膠囊及軟膠囊取內(nèi)容物充分混勻，丸劑及片劑充分粉碎混勻，散劑及口服液充分混勻。

5.2試樣提取

準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣2 g（精確至0.01 g）于15mL具塞離心管中，加入10mL提取劑（3.1.2）。加蓋后振搖或渦旋振蕩0.5 min，放置至澄清（30 min內(nèi)）或4000 r/min離心5min，取上清液作為待測(cè)液，立即測(cè)定。

注：試樣提取和凈化（5.2）過(guò)程可按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，不做限定。

5.3 測(cè)定步驟

吸取200μL待測(cè)液滴加到檢測(cè)卡（3.4.1.1）上的加樣孔中，開(kāi)始計(jì)時(shí)。3～8 min內(nèi)觀(guān)察質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）和檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）的顯色情況，進(jìn)行結(jié)果判定。

5.4 質(zhì)控試驗(yàn)

每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)。

5.4.1 空白試驗(yàn)

稱(chēng)取空白試樣，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。

5.4.2 加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱(chēng)取空白試樣2 g（精確至0.01g）置于15mL具塞離心管中，加入一定體積的巴比妥類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)中間液（3.3.2），使巴比妥類(lèi)化學(xué)成分添加濃度為：巴比妥40 mg/kg（或苯巴比妥40 mg/kg，異戊巴比妥60 mg/kg，司可巴比妥鈉60 mg/kg）。按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。

6.結(jié)果判定

通過(guò)對(duì)比控制線(xiàn)（C線(xiàn)）和檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定，也可根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。目視判定示意圖見(jiàn)圖1。

6.1 無(wú)效

控制線(xiàn)（C線(xiàn)）不顯色，表明不正確操作或檢測(cè)卡無(wú)效。

6.2 陰性結(jié)果

檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）和控制線(xiàn)（C線(xiàn)）均顯色，表明樣品中巴比妥類(lèi)化學(xué)成分低于方法檢測(cè)限，判定為陰性。

6.3 陽(yáng)性結(jié)果

檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）不顯色，控制線(xiàn)（C線(xiàn)）顯色，表明樣品中巴比妥類(lèi)化學(xué)成分的含量高于方法檢測(cè)限，判定為陽(yáng)性。

6.4 質(zhì)控試驗(yàn)要求

空白試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。

7 結(jié)論

當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，應(yīng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行確證。

8 性能指標(biāo)

8.1 檢測(cè)限

巴比妥40mg/kg、苯巴比妥40mg/kg、異戊巴比妥60mg/kg、司可巴比妥鈉60mg/kg。

8.2 靈敏度

靈敏度應(yīng)≥96%。

8.3 特異性

特異性應(yīng)≥98%。

8.4 假陰性率

假陰性率應(yīng)≤4%。

8.5 假陽(yáng)性率

假陽(yáng)性率應(yīng)≤2%。

8.6 相對(duì)準(zhǔn)確度

相對(duì)準(zhǔn)確度應(yīng)≥96%。

注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見(jiàn)附錄A

9其他

本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不做限定，分析步驟和結(jié)果判定可以根據(jù)廠(chǎng)家試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。方法使用者在使用替代試劑、試劑盒或操作步驟前，須對(duì)其進(jìn)行考察，應(yīng)滿(mǎn)足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)。

本方法參比標(biāo)準(zhǔn)為《國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件（批準(zhǔn)件編號(hào)2009024）》和《保健食品中75種非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)BJS 201710》。